A Galeria Palatina abriga uma das coleções de obras mais importantes da Itália dos séculos XVI e XVII, com um charme incomum dado pelo arranjo das pinturas, colocadas com seus quadros ricos em salas finamente decoradas com estuque no estilo das pinturas do século XVII: como as pinturas antigas, das quais é o exemplo histórico mais importante da Itália, coloca as pinturas de acordo com um critério decorativo e estético e não científico. Foi o Grão-Duque Leopoldo que, entre o final do século XVIII e o início do século XIX, decidiu transferir parte das ricas coleções dos Medici dos Uffizi para o Palácio Pitti por razões de espaço. Hoje é o primeiro Museu de Florença pelo número de obras expostas. Possui obras de Pontormo, Filippo Lippi, Raffaello (Madonna della Seggiola, La Velata), Ticiano (Maddalena Penitente) e Andrea del Sarto, obras dos mestres florentinos dos séculos XVI e XVII e obras de Caravaggio, Rubens (le conseguenze della guerra), Van Dyck, Salvator Rosa.