Il castello di Hohentübingen si erge dallo Schlossberg, alto 372 metri, come un possente edificio rinascimentale a quattro ali con torri rotonde. I signori di Tubinga, elevati al rango di conti palatini nel XII secolo, risiedettero qui finché non vendettero il castello e la città ai conti di Württemberg nel 1342.
Come residenza dei duchi del Württemberg, il castello di Hohentübingen perse la sua importanza già nel XVI secolo. L'arco trionfale del portale principale, costruito nel 1607, è particolarmente prezioso dal punto di vista storico-artistico. È considerato un capolavoro del tardo Rinascimento. L'università prese possesso delle prime stanze del palazzo già a metà del XVIII secolo e nel 1816 il re Guglielmo I del Württemberg trasferì l'intero palazzo all'università. La biblioteca universitaria, con circa 60.000 volumi, fu temporaneamente ospitata nella Sala dei Cavalieri, nella torre nord-est fu allestito un osservatorio e nella cucina del castello fu allestito un laboratorio chimico, oggi visitabile come "laboratorio del castello" (si veda "Visite ai musei e alle collezioni").
La botte nella cantina del castello, costruita dal duca Ulrich nel 1549, è considerata la più antica botte da vino gigante sopravvissuta al mondo ed è ufficialmente inserita nel Guinness dei primati. Misura circa 6,80 metri di lunghezza e circa 4,70 metri di altezza. La sua capacità è di circa 84.000 litri ed è stata riempita due volte di vino. Davvero un'attrazione! Può essere visitata solo nei mesi invernali.