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La Galerie Palatine abrite l'une des plus importantes collections d'œuvres des XVIe et XVIIe siècles en Italie. Elle possède un charme inhabituel donné par la disposition des tableaux, placés avec leurs riches cadres dans des salles finement décorées de stucs dans le style des galeries de peinture du XVIIe siècle : comme les anciennes galeries de peinture, dont elle est l'exemple historique le plus important en Italie, elle place les tableaux selon un critère décoratif et esthétique et non scientifique. C'est le Grand-Duc Léopold qui, entre la fin du XVIIIe et le début du XIXe siècle, a décidé de transférer une partie des très riches collections des Médicis des Offices au Palazzo Pitti pour des raisons d'espace. Aujourd'hui, c'est le premier musée de Florence par le nombre d'œuvres exposées : des œuvres de Pontormo, Filippo Lippi, Raffaello (Madonna della Seggiola, La Velata), Tiziano (Maddalena Penitente) et Andrea del Sarto, des œuvres de maîtres florentins des XVIe et XVIIe siècles et des œuvres de Caravage, Rubens (Les conséquences de la guerre), Van Dyck, Salvator Rosa.
