Slottet Hohentübingen reser sig från det 372 meter höga Schlossberget som en mäktig fyravingad renässansbyggnad med runda torn. Herrarna av Tübingen, som på 1100-talet upphöjdes till greve i pfalzgraflig ställning, bodde här tills de 1342 sålde slottet och staden till grevarna av Württemberg.
Som residens för hertigarna i Württemberg förlorade slottet Hohentübingen sin betydelse redan på 1500-talet. Triumfbågen i huvudportalen, som byggdes 1607, är särskilt konsthistoriskt värdefull. Den anses vara ett mästerverk från senrenässansen. Universitetet tog över de första rummen i slottet redan i mitten av 1700-talet, och 1816 överförde kung Wilhelm I av Württemberg hela slottet till universitetet. Universitetsbiblioteket med cirka 60 000 volymer var tillfälligt inrymt i riddersalen, ett observatorium inrättades i det nordöstra tornet och ett kemiskt laboratorium inrättades i slottsköket, som nu kan besökas som "slottslaboratorium" (se "Rundturer genom museer och samlingar" ).
Tunnan i slottskällaren som byggdes av hertig Ulrich 1549 anses vara den äldsta bevarade jättevinfaten i världen och är officiellt upptagen i Guinness rekordbok. Det mäter cirka 6,80 meter i längd och cirka 4,70 meter i höjd. Dess kapacitet är cirka 84 000 liter och har fyllts två gånger med vin. Det är verkligen en attraktion! Kan endast besökas under vintermånaderna.