De Basiliek van het Heilig Graf staat langs de Via Francigena, en volgens een legendarische traditie werd de kerk opgericht door koningin Matilda van Westfalen, rechtstreeks naar Rome met een karavaan van muildieren beladen met goud om een heiligdom gewijd aan het Heilig Graf te bouwen. In Acquapendente zouden de muilezels "bevriezen", knielen en weigeren weer te vertrekken, en tijdens de nacht zou de soeverein een droom hebben die haar ertoe zou aanzetten om haar project op deze plek uit te voeren. Het gebouw dateert uit de XII eeuw en was oorspronkelijk in Romaanse stijl en behorend tot de Benedictijnse orde, met bijgevoegde klooster. De huidige verschijning van de kerk is het resultaat van talrijke interventies: de gevel dateert uit de ' 700 en is het werk van Nicola Salvi (architect van de Trevifontein in Rome), dan gedeeltelijk gewijzigd als gevolg van de schade van de laatste oorlog. Op de gevel wordt gereproduceerd de buste van Paus Innocent X Pamphili (het origineel van Alessandro Algardi wordt bewaard in het Stadsmuseum), die te wijten is aan de overdracht van het bisdom aan Acquapendente, na de vernietiging van Castro. Intern heeft de kerk een Latijns kruis plan met 3 Beuken, de pastorie is verhoogd om ruimte te laten voor de Crypte hieronder. De crypte is van het type "hall", gebouwd op 24 kolommen waarop rust kruis gewelven. Het bewaart een SACELLO dat nog steeds een bedevaartbestemming is, het oudste exemplaar in de wereld van het graf van Jezus.Daarom wordt Acquapendente ook wel het Jeruzalem van Europa genoemd. De kopie van het Heilig Graf dateert uit de tiende eeuw en rond, een paar eeuwen later, werd de Crypte daar gebouwd. Van binnen is een steen, waarvan gezegd wordt dat hij daar gebracht is door de kruisvaarders en gebaad is in het bloed van Christus. Daarom is Acquapendente nog steeds een belangrijke stop op de bedevaart langs de Via Francigena.
