La Galerie Palatine abrite l'une des plus importantes collections d'œuvres des XVIe et XVIIe siècles en Italie, avec un charme rare donné par la disposition des tableaux, placés avec leurs riches cadres dans des salles finement décorées de stucs dans le style des peintures du XVIIe siècle : comme les peintures anciennes, dont elle est l'exemple historique le plus important en Italie, elle place les tableaux selon un critère décoratif et esthétique plutôt que scientifique. C'est le Grand-Duc Léopold qui, entre la fin du 18ème et le début du 19ème siècle, a décidé de déplacer une partie des riches collections médicéennes des Offices au Palazzo Pitti pour des raisons d'espace. C'est aujourd'hui le premier musée de Florence par le nombre d'œuvres exposées. Il présente des œuvres de Pontormo, Filippo Lippi, Raffaello (Madonna della Seggiola, La Velata), Titien (Maddalena Penitente) et Andrea del Sarto, des œuvres des maîtres florentins des XVIe et XVIIe siècles et des œuvres de Caravage, Rubens (Le conseguenze della guerra), Van Dyck, Salvator Rosa.
