La Sala dello Zodiaco (Sala dello Zodiaco) era la camera da letto di Guglielmo Gonzaga e una delle sale più interessanti del palazzo. Ha un affresco astronomico del carro di Diana trainato da cani tra le costellazioni dipinte sul soffitto da Lorenzo Costa il Giovane nel 1579. La stanza fu anche la camera da letto di Napoleone durante le guerre napoleoniche. La sala era quindi anche conosciuta come Napoleone. Il cratere (coppa) di sacrifici e libagioni allude all'immortalità della famiglia Gonzaga. Il corvo, un uccello sacro ad Apollo, fu trasformato in una costellazione dal dio. Il segno della Vergine, con l'orecchio in mano, assume l'aspetto di Astrea e Cerere ed è l'emblema di Vincenzo Gonzaga. Il firmamento ruota attorno al carro di Diana, trainato da un branco di cani. La dea incinta è la trasfigurazione di Eleonora d'Austria, moglie del duca di Mantova. Secondo l'antica tradizione, lo Scorpione detiene il segno della Bilancia nei suoi artigli.
