La Sala dello Zodiaco (salle du Zodiaque) était la chambre à coucher de Guglielmo Gonzaga et l'une des pièces les plus intéressantes du palais. Elle possède une fresque astronomique représentant le char de Diane tiré par des chiens parmi les constellations, peinte au plafond par Lorenzo Costa le Jeune en 1579. Cette pièce était également la chambre à coucher de Napoléon pendant les guerres napoléoniennes. La chambre était donc également connue sous le nom de "Napoleon's". Le krater (coupe) des sacrifices et des libations fait allusion à l'immortalité de la famille Gonzague. Le corbeau, un oiseau sacré pour Apollon, a été transformé en constellation par le dieu. Le signe de la Vierge, avec l'oreille dans la main, prend l'apparence d'Astrea et de Ceres et est l'emblème de Vincenzo Gonzaga. Le firmament tourne autour du char de Diane, tiré par une meute de chiens. La déesse enceinte est la transfiguration d'Eleonora d'Autriche, épouse du duc de Mantoue. Selon l'ancienne tradition, le Scorpion tient le signe de la Balance dans ses griffes.