El mosaico del suelo de la catedral es de un tamaño considerable, ya que se extiende a lo largo de toda la nave principal, y está formado por unas 600.000 teselas policromadas de composición caliza local. Representa el Árbol de la Vida y fue encargado por el obispo Gionata en 1163 y realizado por el monje Pantaleone de la abadía de S. Nicola di Casale en Otranto, que terminó la obra maestra en 1165. Una primera peculiaridad del mosaico es el hecho de que lleva grabado el nombre de su autor, en correspondencia con la entrada principal, hecho al menos insólito para la época y probablemente debido al privilegio de dar crédito al artista como agradecimiento por el espléndido éxito de la obra. Como se ha dicho, el significado que la mayoría de los expertos dan a la representación es el del Árbol de la Vida, pero hay teorías controvertidas y nunca se ha llegado a una conclusión que satisfaga a todas las escuelas de pensamiento, lo que deja un velo de misterio en torno a la obra. Sin embargo, lo que está claro es que alrededor del árbol, que se extiende desde la entrada hasta el presbiterio, se despliegan multitud de escenas del Antiguo Testamento que simbolizan el tortuoso camino recorrido por el hombre para superar los pecados y alcanzar la salvación eterna: los sucesos de Adán y Eva, los de Caín, Abel, la concepción del Infierno y el Paraíso. No faltan las referencias mitológicas e históricas, como las del rey Arturo y Alejandro Magno. También es muy llamativa la representación de los doce meses del año a los que se dedica una parte circular, así como la representación de las labores estacionales relativas. La riqueza y variedad de los elementos y símbolos presentes es una prueba más de cómo Otranto ha representado siempre un punto de encuentro entre culturas, pueblos y diferentes corrientes artísticas y culturales. La posición geográfica de la que goza la ciudad ha facilitado el encuentro y el intercambio entre Occidente y Oriente, exponiendo a menudo el lugar a ataques e invasiones que, más que favorecer, han impuesto su propia cultura. Tras milenios de historia, lo que queda es una serie de tesoros, huellas, signos del paso de diferentes pueblos, que han enriquecido los tesoros de Otranto también y sobre todo desde el punto de vista artístico.