et sjældent smukke teater, det første eksempel på et stabilt teater i Europa, er af største betydning for de europæiske teaterbygninger. Vincenzo Scamozzi, der lige havde bygget Teatro Olimpico i Vicenza, tegnede et hofteater for hertug Vespasiano mellem 1588 og 1590. Det elegante ydre har to ordener: den nederste, med vinduer, portaler og askebladsindfatninger, der hviler på en høj sokkel, og den øverste, der er kendetegnet ved doriske pilastre, nicher og vinduer, der er overdækket af trekantede og buede gavle med ovoide kopper. På den stræbeformede facade er der en versal med indskriften ROMA QVANTA FVIT IPSA RVINA DOCET (ruinerne selv lærer os, hvor stor Rom var), et motto, der findes på titelsiden af to af de syv bøger om arkitektur, som Bologneseren Sebastiano Serio har skrevet. Den rektangulære sal er opdelt i to pladser, der er adskilt af det korte rektangulære orkester: den ene er optaget af scenen og den anden af den halvcirkulære cavea. En nyskabelse er den bagindgang, der er forbeholdt kunstnerne (musikere og skuespillere), og som giver adgang til omklædningsrummene. På den forhøjede scene var den faste scene designet af Scamozzi, som blev ødelagt i anden halvdel af det 18. århundrede. Den repræsenterer et byperspektiv, en gade omkranset af adelige og borgerlige bygninger. Fornemmelsen af dybde blev forstærket af scenens hældning og det nedhængte loft, et tøndehvælv af flodrør, der var stuk og blåmalet, og som skrånede over selve scenen. Bygningerne på scenen var lavet af træ, stuk og malet falsk marmor og falsk sten. Freskoerne på siderne af scenen var en del af scenen og supplerede Scamozzis perspektiviske synsvinkel. På den ene side kan man genkende en cerusico-barbers værksted. Det eneste, der er tilbage af den oprindelige indretning, er den harmoniske loggia med en statuarisk kroning, der forestiller de vigtigste olympiske guder. Gudefigurerne og de elegante stukkaturlister blev udført af den venetianske billedhugger Bernardino Quadri efter et design af Scamozzi. De monokrome malede figurer på loggiaens bagvæg forestiller romerske kejsere. I nicherne er der fire buster, der forestiller gudinden Cybele og tre antikke condottieri. De 2 store vægfresker forestiller triumfbuer i antik stil, hvor der i de centrale buegange åbner sig byudsigter. Til venstre er malet Piazza del Campidoglio og til højre Castel Sant'Angelo. På den entablatur, der overdækker buen til højre, er der en dedikation til kejser Rudolph II af Habsburg, som ophøjede Vespasian til hertug i 1577. Freskerne, der løber rundt om hele omkredsen af rummet umiddelbart under taget, simulerer en loggia, der er animeret af musikere, komikere, damer og riddere klædt i dragter fra slutningen af det 16. århundrede. Referencen til Paolo Veroneses stil er tydelig, især til freskerne i Villa Barbaro i Maser. Bygningen, der stod færdig i februar 1590, blev indviet i forbindelse med karnevalsfesterne. Et stabilt teaterkompagni, der var lønnet af hertugen, forblev i Sabbioneta indtil Vespasianos død, hvorefter teatret, ligesom hele byen, oplevede en lang periode med nedgang.
