Pendirian Studium ditetapkan oleh Kaisar Frederick II dari Swabia pada tanggal 5 Juni (5 Juli menurut beberapa sumber) 1224 melalui surat edaran (generalis lictera) yang dikirim dari Syracuse. Karena didirikan atas perintah kaisar sendiri, Universitas Napoli benar-benar dianggap sebagai universitas sekuler pertama di Eropa yang bertipe negara (yaitu tidak didirikan oleh serikat atau asosiasi intelektual atau mahasiswa, tetapi berdasarkan keputusan penguasa).Ada dua alasan utama yang mendorong kaisar untuk membangun Studium: pertama, pelatihan eksklusif bagi staf administratif dan birokrasi curia regis (kelas penguasa kerajaan) dan dengan demikian mempersiapkan para ahli hukum yang akan membantu penguasa dalam mendefinisikan sistem negara dan dalam pelaksanaan hukum; kedua, untuk memfasilitasi rakyatnya dalam pendidikan budaya mereka, menghindarkan mereka dari perjalanan yang tidak berguna dan mahal ke luar negeri.Pilihan tempat jatuh pada Napoli karena alasan tidak hanya budaya (kota ini memiliki tradisi panjang dalam hal ini, terkait dengan sosok Virgil, yang secara eksplisit diingat dalam sebuah dokumen pada masa itu), tetapi juga geografis dan ekonomi (perdagangan laut, iklim yang sejuk, dan posisi strategis di dalam Kerajaan, sampai batas tertentu, sangat menentukan). Penyelenggaraan Studium bergantung pada karya dua ahli hukum terkemuka dari Campania: Pier delle Vigne dan Taddeo da Sessa.
