A Basílica do santo Sepulcro, fica ao longo da Via Francigena, e de acordo com uma lendária tradição, a igreja foi fundada pela rainha Matilde de Westphalia, direto para Roma, com uma caravana de mulas carregadas de ouro para criar um santuário dedicado ao Santo Sepulcro. Em Acquapendente as mulas "congelariam", ajoelhando-se e recusando-se a sair novamente, e durante a noite o soberano teria um sonho que a induziria a implementar seu projeto neste lugar. O edifício remonta ao século XII e foi originalmente em Estilo Românico e pertencente à Ordem Beneditina, com Convento anexado. A aparência atual da Igreja é o resultado de numerosas intervenções: a fachada remonta a ' 700 e é obra de Nicola Salvi (arquiteto da fonte Trevi em Roma), então parcialmente modificada devido aos danos da última guerra. Na fachada, é reproduzido o busto do Papa Inocêncio X Pamphili (o original por Alessandro Algardi é mantida no Museu da Cidade), para o qual é devido a transferência da diocese de Acquapendente, após a destruição de Castro. Internamente a igreja tem um plano de cruz latina com 3 Naves, o presbitério é levantado para deixar espaço para a cripta abaixo. A cripta é do tipo" hall", construída em 24 colunas sobre as quais o resto cruza cofres. Preserva um SACELO que ainda é um destino de peregrinação, sendo a cópia mais antiga do mundo do túmulo de Jesus.É por isso que Acquapendente também é chamada de Jerusalém da Europa. A cópia do Santo Sepulcro remonta ao século X e, alguns séculos depois, a cripta foi construída lá. Dentro está uma pedra, que se diz ter sido trazida pelos cruzados e banhada no sangue de Cristo. É por isso que Acquapendente ainda é uma importante parada na peregrinação ao longo da Via Francigena.
